Этапы криопереноса эмбрионов и описание процедуры

ЭТАПЫ ЭКО: проведение процедуры

1. Ультразвуковой мониторинг фолликулогенеза

а) Под  контролем УЗИ проводится стимуляция овуляции —  происходит одномоментное созревание нескольких яйцеклеток (вместо одной, как в обычном менструальном цикле). Занимает, в среднем, 10-20 дней. По назначению врача  подкожные или внутримышечные инъекции стимулирующих гормональных препаратов, доза которых подбирается индивидуально. Врач оценивает ответ яичников на вводимые дозы препаратов и при необходимости проводит корректировку дозы. Также оценивается состояние эндометрия.
 
б) В естественном цикле (без стимуляции овуляции) –  отслеживается появление доминантного фолликула, скорость и синхронность  роста в соответствии с днем менструального цикла и изменениями в эндометрии. Этап занимает 12-16 дней. Препараты, стимулирующие овуляцию, не назначаются.

2. Трансвагинальная пункция фолликулов 

Это метод получения яйцеклеток, занимает обычно 10-20 минут. Эта манипуляция проводится под общим обезболиванием в операционной. Созревшие фолликулы пунктируют под ультразвуковым контролем специальной одноразовой иглой через стенку влагалища.

3. Эмбриологический этап 

Проводится в стерильной эмбриологической лаборатории. Здесь происходит слияние половых клеток мужа и жены, затем в специальном инкубаторе развитие эмбрионов. Обычно культивирование эмбрионов занимает несколько суток до тех пор, пока они не достигнут необходимой стадии развития.

4. Перенос эмбрионов 

Проводится в стерильных условиях также под ультразвуковым контролем и не требует анестезии. Обычно в полость матки переносят не более 3 эмбрионов.

5. сдачи ХГЧ на беременность

Самый томительный период после переноса эмбрионов —  сдачи ХГЧ на беременность, который обычно проводят на 14 день после переноса эмбрионов. В течение этого времени назначаются препараты, которые поддерживают пока еще хрупкую беременность и помогают ей развиваться.
 

Может ли плодное яйцо выпасть из полости матки?

Распространенным страхом среди женщин, прошедших ЭКО, является риск выпадения эмбриона из матки. Выпадение плодного яйца из маточной полости даже до момента его имплантации в эндометрий исключено. Матка – мускульный орган, который сообщается с влагалищем посредством полой мышечной трубки (шейка матки). После процедуры ЭКО она сокращается, что препятствует проникновению эмбрионов во влагалище.

Учеными было проведено исследование, во время которого женщин разделили на две группы, после чего в маточную полость были введены воздушные пузырьки. Первая группа строго соблюдала постельный режим, а вторая занималась привычными делами без ограничений. По истечению определенного времени специалисты оценили результаты: особых различий в положении «эмбрионов» у пациенток обеих групп не обнаружилось.

Противопоказания для проведения ЭКО:

1. соматические и психические заболевания, являющиеся противопоказаниями для вынашивания беременности и родов;
2. врожденные пороки развития или приобретенные деформации полости матки, при которых невозможна имплантация эмбрионов или вынашивание беременности;
3. опухоли яичников;
4. доброкачественные опухоли матки, требующие оперативного лечения;
5. острые воспалительные заболевания любой локализации;
6. злокачественные новообразования любой локализации, в том числе в анамнезе.

1. Отбор и обследование пациентов

Перед тем как начинать лечение, стоит выяснить, в чем причины проблемы. Некоторые виды бесплодия не нуждаются в проведении ЭКО, достаточно лекарственного или хирургического лечения, но также случается, что зачатие естественным путем невозможно в принципе.

2. Индукция суперовуляции, включая мониторинг фолликулогенеза и развития эндометрия

Суперовуляцией называется созревание сразу нескольких яйцеклеток в одном менструальном цикле, тогда как при обычной овуляции у женщины каждый месяц созревает только одна-две яйцеклетки. В программе ЭКО необходимо получить несколько яйцеклеток, потому что некоторые яйцеклетки могут не оплодотвориться, а полученные эмбрионы — остановиться в развитии.

В программе ЭКО для стимуляции и контроля суперовуляции используют гормональные препараты.

Оплодотворение полученных ооцитов (стандартное или методом ИКСИ)

Оплодотворение полученных ооцитов — ключевой момент программы ЭКО. Неправильный выбор метода оплодотворения может свести на нет все предшествующие этапы и поставить крест на результативности программы ЭКО. Существуют 2 возможных методики оплодотворения в программе ЭКО:

• стандартный;
• ИКСИ — интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида внутрь яйцеклетки (intracytoplasmicspermatozoidinjection — ICSI).

Выбор метода оплодотворения в первую очередь определяется показателями спермограммы. При нормальных показателях эякулята в день пункции и при отсутствии других показаний, оплодотворение проводится стандартным методом.

При стандартном методе происходит «имитация» естественного процесса оплодотворения, когда в питательную среду к яйцеклетке помещается суспензия отмытых сперматозоидов и самый сильный и самый подвижный сперматозоид самостоятельно оплодотворяет яйцеклетку.

ИКСИ — в первую очередь способ преодоления мужского бесплодия, т.е. основными показаниям для его проведения являются различные отклонения в спермограмме.

Метод ИКСИ подразумевает собой отбор под микроскопом самого подвижного, самого визуально правильного
(по строению) сперматозоида и введение его в цитоплазму яйцеклетки с помощью специальной микроиглы. Использование этой методики позволяет получить оплодотворение при самых тяжелых формах мужского бесплодия, даже при наличии единичных сперматозоидов в эякуляте, либо при применении хирургических методов получения сперматозоидов из яичка или придатка яичка.

ИКСИ является одним из самых высокотехнологичных методов ВРТ, поэтому требует использования современного специализированного оборудования (инвертированный микроскоп Nikonclipse, микроманипулятор NarishigeTakanome) и качественных расходных материалов (Origio, COOK, Vitrolife).

Другие возможные показания для проведения ИКСИ (по приказу Минздрава № 107н):

• эякуляторная дисфункция (ретроградная эякуляция);
• отсутствие или низкий процент оплодотворения (менее 20 %) ооцитов в предыдущей программе ЭКО;
• малое количество ооцитов (менее четырех) (относительное показание);
• оплодотворение размороженных ооцитов;
• при необходимости проведения преимплантационного генетического тестирования (относительное показание).

В определенных ситуациях, эмбриолог может рекомендовать в рамках оплодотворения методом ИКСИ дополнительно использовать чашку ПИКСИ (PICSI — PhysiologicIntraCytoplasmicSpermInjection).

Суть методики PICSI заключается в том, что морфологически правильные и зрелые сперматозоиды с нормальным генетическим материалом имеют на своей поверхности достаточное количество рецепторов к гиалуроновой кислоте, что позволяет им связываться с нею на поверхности чашек PICSI. На основании этого мы косвенно можем судить о качестве генетического материала сперматозоида, который мы потенциально выбираем для оплодотворения ооцит. Для спермы со слабой связывающей способностью с гиалуронатом при проведении теста HBA, отмечено значительное увеличение показателя клинических беременностей при использовании ПИКСИ в рамках процедуры ИКСИ. Использование связанных с гиалуронатом сперматозоидов обеспечивает проведение ИКСИ лучшими из пробы сперматозоидами.

Вспомогательный хэтчинг

Яйцеклетка и эмбрион человека и других млекопитающих в первые дни развития окружены белковой оболочкой (зоной пеллюцида) – своеобразным аналогом скорлупы птичьего яйца. Чтобы имплантироваться в матку, растущая бластоциста прорывает прозрачную оболочку и выходит из нее; этот процесс называется хэтчинг – «вылупление».

Вспомогательный хэтчинг (ВХ) – это микроманипуляционная процедура, при которой проделывается отверстие в прозрачной оболочке непосредственно перед переносом эмбриона в матку в программе ЭКО, чтобы облегчить его естественное «вылупление» и имплантацию. Во время процедуры хетчинга одновременно можно удалить избыточные безъядерные фрагменты. В некоторых случаях ВХ может повысить вероятность наступления беременности.

Показаниями для вспомогательного хетчинга являются:

1. возраст пациентки старше 37 лет;
2. толщина прозрачной оболочки > 17 im;
3. другие аномалии прозрачной оболочки (двуслойная или необычной формы);
4. более 20% фрагментов цитоплазмы;
5. две и более неэффективных предшествующих попыток ЭКО.

В научной литературе приводятся данные о том, что у пациенток старшего репродуктивного возраста зона пеллюцида имеет повышенную плотность, что затрудняет «вылупление» из неё эмбриона. Однако необходимо помнить, что зона пеллюцида является защитным барьером для эмбриона, и сама по себе процедура хэтчинга может повредить эмбрион. Поэтому окончательное решение о применении ВХ принимается индивидуально для каждой пациентки на основе анализа конкретной ситуации совместно врачом и эмбриологом.

Как происходит имплантация эмбриона

Прикрепление оплодотворенного яйца к стенке матки происходит в среднем на 7-14 день после зачатия. Находясь в матке, оно начинает выделять особые ферменты, которые расщепляют слизистую оболочку матки, что позволяет яйцеклетке проникать все глубже и глубже. Имплантация является самым первым взаимодействием мамы и будущего ребенка.

Перенос эмбрионов осуществляется следующим образом:

• подготовленная пациентка располагается в гинекологическом кресле;
• доктор обнажает шейку матки в зеркалах;
• катетер с питательной жидкостью с эмбрионами вводится в полость матки;
• под контролем УЗИ происходит перенос.

Вернуться к обычному ритму жизни женщина может уже на следующий день. Следует воздержаться от половых контактов, физических и эмоциональных нагрузок, горячих ванн.

Нарушения оплодотворения

Половые клетки (сперматозоиды и яйцеклетки) отличаются от остальных одинарным набором хромосом — по 23, вместо 46 у остальных клеток организма. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота) содержит уже 46 хромосом — половина от матери половина от  отца. В первые часы хромосомы еще не смешиваются, а пребывают в зиготе отдельно друг от друга — в пронуклеусах. На этом этапе встречаются различные аномалии образования последних, которые в дальнейшем приведут к дефектам развития эмбриона:

• Один пронуклеус в зиготе. Аномалия обычно возникает при активации яйцеклетки без сперматозоида. Для активации, то есть запуска сложных биохимических процессов, связанных с синтезом белка, не обязательно наличие сперматозоида — достаточно легкого контакта с ним.
• Три пронуклеуса. Аномалия возникает, например, при оплодотворении двумя сперматозоидами или в результате неправильного формирования ядерной мембраны.

Возможны и отклонения с большим числом пронуклеусов, но они встречаются значительно реже

Выявление аномалии на этом этапе исключительно важно, поскольку в период дробления выявить дефекты развития невозможно

Рекомендации врача

Чтобы повысить шансы на имплантацию эмбриона в стенку матки, следует:

1. в течение первых суток после ЭКО отказаться от принятия ванны или душа;
2. избегать поднятия тяжестей и эмоциональных перегрузок;
3. соблюдать половой покой в течение 10-14 дней до получения результатов теста ХГЧ;
4. исключить из рациона продукты, провоцирующие метеоризмы;
5. отказаться от ношения тесной одежды (узких джинсов, брюк);
6. совершать ежедневные получасовые прогулки на свежем воздухе.

Первые дни после процедуры ЭКО желательно провести в домашней обстановке, чередуя прогулками с отдыхом. Врачи рекомендуют принимать витаминизированные биодобавки для поддержания нормального обмена веществ в организме.

Остановка программы ЭКО

Наиболее частая причина отмены цикла – слабый ответ яичников пациентки на стимуляцию или его отсутствие. Слабый ответ яичников на стимуляцию чаще встречается у женщин старше 35 лет и женщин с оперированными яичниками, т.е. у тех пациенток, у кого фолликулярный резерв снижен. Прогнозировать слабый ответ на стимуляцию можно по уровню ФСГ и АМГ в крови пациентки.. Вследствие снижения количества фолликулов, повышается уровень ФСГ и снижается содержание АМГ. Эта группа пациенток имеет самые низкие шансы забеременеть с помощью ЭКО. Таким образом, по исходному уровню ФСГ и АМГ в крови врач определяет стартовую дозу препарата для стимуляции яичников.

Другой причиной отмены цикла может быть слишком большое количество созревших фолликулов. Большое количество фолликулов созревает у молодых, худеньких пациенток, а также бывает у женщин с СПКЯ. Если у пациентки созревает более 25 фолликулов, или если уровень эстрадиола в крови выше 6000 пг/мл, врач может отменить цикл, чтобы снизить риск развития тяжелой формы синдрома гиперстимуляции яичников (СГЯ) еще до введения ХГЧ. Альтернативой отмены цикла является проведение пункции яичников и замораживание всех полученных эмбрионов. Это дает возможность спасти цикл ЭКО. Если эмбрионы не будут перенесены в полость матки, риск возникновения СГЯ тяжелой степени значительно сокращается, поскольку толчком для развития тяжелой формы СГЯ обычно служит наступление беременности.

Причиной для остановки программы ЭКО также может быть заболевание пациентки во время проведения программы, появление гидросальпингса или выявление патологических изменений эндометрия по данным УЗИ. В некоторых случаях можно отложить перенос, а полученные эмбрионы подвергнуть криоконсервации с целью их переноса в следующем менструальном цикле.

Этап культивирования эмбрионов в процессе осуществления ЭКО

После забора яйцеклеток, их подвергают оплодотворению – обычно это происходит через несколько часов после пункции. С момента, когда доктор проводит оценку факта наступления оплодотворения, отсчитывается начало этапа культивирования. День процедуры пункции фолликулов считается нулевым.

В целом, этап культивирования занимает до шести дней.

Первый день. Доктор осматривает ооциты (яйцеклетки, которые подвергались оплодотворению). У большинства из них уже обнаруживаются признаки успешного оплодотворения. Однако, из всех наличествующих ооцитов, примерно 10-15% являются непригодными для дальнейшей культивации, так как являются незрелыми или имеют дегенеративные формы.

Через 16-20 часов после инсеминации у яйцеклеток наблюдается стадия презиготы: в клетке уже присутствуют мужской и женский типы генетического материала, которые ещё не слились в единое целое. В таком случае считается, что оплодотворение прошло успешно.

Существуют случаи, когда одну яйцеклетку оплодотворяют два и более сперматозоида – такие зародыши отбраковываются и не участвуют в дальнейшем в процессе культивации. Возможно и полное отсутствие результата инсеминации, когда не оплодотворяется ни одна яйцеклетка.

В этот период времени оплодотворённую клетку могут подвергнуть консервации. Крайне редко в первый день осуществляется перенос зиготы в женский организм: во-первых, на этой стадии эмбрион ещё должен некоторое время находиться в маточных трубах, а не в матке, во-вторых, медики предпочитают ждать наступления этапа естественной выбраковки эмбрионов, а также проявления у них любых показателей, по которым можно отобрать наиболее удачный для дальнейшей беременности эмбрион.

Второй день. В оплодотворённых яйцеклетках происходит их дробление на две части – бластомеры. В этот период медики уже могут оценить качество зародыша по соотношению объёма зародыша к безъядерным фрагментам в цитоплазме. Клетки, в которых количество безъядерных элементов превышает по объёму сам зародыш, считаются материалом с низким потенциалом к имплантации.

Если на второй день возможно отобрать одну или две яйцеклетки подходящего качества, их могут уже вживить в женский организм.

Третий день. В это время количество оплодотворённых бластомеров приближается к 6-8 клеткам. В течении первых двух дней развитие эмбриона происходило за счёт ресурсов, накопленных яйцеклеткой в период её созревания в яичнике. Если у клетки присутствуют хромосомные патологии, на третий день она останавливается в развитии, то есть в действие вступает так называемый процесс естественной отбраковки.

Долгое время с момента изобретения метода ЭКО, трансплантация эмбриона происходила именно в этот день, так как более длительный процесс культивирования был недоступен из-за несовершенства существующей на тот момент лабораторной техники. Сейчас эта проблема решена развитием более современных технологий ЭКО.

Четвёртый день. Количество бластомеров доходит до 16 штук. В этот период начинается процесс компактизации клеток. Он заключается в том, что межклеточные контакты уплотняются, а поверхность эмбриона сглаживается. Четвёртый день характеризуется также началом стадии морулы. В женском организме в это время зародыш переходит по маточным трубам в полость матки. Именно поэтому имплантация эмбриона часто происходит именно в такой момент. В конце четвёртого дня в моруле образуется полость.

Пятый и шестой день. Зародыш переходит в стадию бластоцисты, когда объём внутренней полости морулы достигает более 50% общего её объёма. Бластоциста состоит из трофэктодермы и эмбриобласта.

Трофэктодерма относится к внешнему слою эмбриона – она отвечает за его прикрепление к эпителию матки. Эмбриобласт формирует начальное развитие тело плода, и представляет собой совокупность клеток внутри трофэктодермического пузыря.

На этом заключительном этапе процесса культивации у медиков есть возможность оценить качество бластоцисты по размеру её полости, по степени развития её составных частей (трофэктодермы и эмбриопласта).

По статистике, каждый второй эмбрион шестого дня помещается в матку с дальнейшим успешным исходом. Таким образом удаётся избежать проявлений многоплодия и переноса большого количества эмбрионов в матку для увеличения степени успешности процедуры ЭКО.

Цены на услуги

Показания к ЭКО:

• женский трубный фактор бесплодия;
• мужской фактор бесплодия, включая обструктивные и необструктивные причины;
• бесплодие у женщины старше 36-37 лет;
• эндометриоз у женщин старше 35 лет;
• идиопатическое бесплодие, при котором неэффективны традиционные, стандартные методы лечения;
• наличие антиспермальных антител;
• генетические аномалии, при которых применяется генетическое исследование эмбриона (ПГД) в целях уменьшения частоты абортов и предотвращения передачи специфических генетических аномалий;
• эндокринное бесплодие, при невозможности достижения беременности с помощью гормонотерапии в течение 6-12 месяцев.

Эффективность лечения при помощи ЭКО определяется различными факторами, Помимо причины, вызвавшей бесплодие, большую роль играет возраст пациентки и длительность бесплодия.

Обследование перед ЭКО

Жене (срок годности анализов указан в скобках):

1. Электрокардиограмма (1 год).
2. Кровь на RW, ВИЧ, гепатиты В и С (при положительном результате-заключение инфекциониста о возможности лечения методом ВРТ) (3 месяца).
3. Цитологическое исследование мазка с поверхности шейки матки и из цервикального канала (1 год)
4. ПЦР наNeisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis (3 мес);
5. Гормоны: ФСГ (2-5 дни цикла), АМГ (на любой день цикла) (6 мес)
6. Флюорография легких (1 год).
7. Заключение терапевта (1 год)
8. УЗИ молочных желез (7-11 дни цикла) женщинам до 40 лет, женщинам старше 40 лет – маммография
9. Определение антител классов M, G (IgM, IgG) к вирусу краснухи (однократно).
10. Группа крови и резус-фактор (однократно).
11. УЗИ органов малого таза
12. Заключение эндокринолога (при наличии патологии) (1 год)
13. Заключение генетика и кариотипирование (по показаниям)

Мужу (срок годности анализов указан в скобках):

1. Спермограмма (6 месяцев)

по показаниям:

1. исследование состояния матки и маточных труб (гистеросальпиногография или гистеросальпингоскопия и лапароскопия);
2. биопсия эндометрия;
3. обследование на наличие антиспермальных и антифосфолипидных антител;