Криоконсервация спермы (продолжение)

По каким критериям оценивается качество размороженных эмбрионов?

Процесс оттаивания, или разморозки эмбрионов, имеет такое же огромное значение, как и заморозка. Медленное оттаивание может привести к образованию кристаллов льда и повреждению клеточных структур. Поэтому скорость нагревания должна быть высокой независимо от того, какой метод криоконсервации был применен.

Количество поврежденных клеток является критерием качества криоконсервированных эмбрионов. В идеале ни одна его клетка не должна пострадать. Такие эмбрионы называются интактными и имеют наибольшие перспективы в плане имплантации и развития.

Однако успешная беременность может наступить и при наличии поврежденных бластомеров. Реальное количество неповрежденных клеток, необходимое для успешной имплантации, неизвестно. В настоящее время для подсадки используются зародыши, у которых хотя бы половина клеток не повреждена. Несмотря на большой ущерб, нанесенный заморозкой, эмбрион сохраняет высокий потенциал к реконструкции и нормальному развитию.

Помимо подсчета поврежденных клеток, используются и другие прогностические показатели. Например, в ряде случаев размороженные зародыши некоторое время культивируют на искусственной питательной среде (если это позволяет стадия их развития). С одной стороны, это уменьшает количество выживших эмбрионов, поскольку наиболее слабые из них погибают, а с другой — это позволяет выбрать наиболее перспективные зародыши, что увеличивает шансы на успешную имплантацию и беременность. Также хорошим прогностическим фактором является возобновление клеточного деления в течение 24 часов после разморозки.

Зачем замораживают сперму доноров?

Замораживание сперматозоидов донора производят по двум причинам.

Первая – образцы всегда в наличии и хранятся в банке спермы.

Вторая – самая главная – предотвращение передачи ВИЧ, вирусных гепатитов и сифилиса. Сперматозоиды донора до начала их использования хранятся в криохранилище минимум 6 месяцев. Это своеобразный карантин.

За это время проводится повторное обследование донора на предмет вышеперечисленных заболеваний. Таким образом, исключается вероятность, что на момент сдачи биологического материала донор был инфицирован, но клинически заболевание еще не проявилось (продромальный период болезни).

Криоконсервация эмбрионов

Криоконсервация эмбрионов может быть частью процедуры ЭКО, в процессе которой получают большее количество эмбрионов, которое необходимо для пересадки. Это делают при желании пары иметь второго ребенка без повторения протокола ЭКО или для подстраховки при неудачном исходе этого протокола.

Кроме того, криоконсервация эмбрионов показана при появлении синдрома гиперстимуляции яичников, когда перенос эмбрионов может не дать необходимый результат или ухудшить состояние женщины.

Еще одним показанием к криоконсервации эмбрионов является недостаточность эндометрия. В этом случае эмбрион также может не имплантироваться в стенку матки. У женщины осуществляют контроль роста эндометрия и когда он готов, переносят зрелые размороженные эмбрионы.

Эмбрионы хорошо переносят криоконсервацию и они успешно размораживаются, не теряя своих свойств, в 95% случаев.

Резюме

Эффективность ЭКО после криоконсервации эмбрионов определяется многими факторами. В их числе критерии отбора подлежащих криохранению эмбрионов, методы замораживания и “оттаивания”, синхронизацией развития эндометрия и эмбриона.

Многое зависит и от состояния здоровья женщины. Однако ее фертильный потенциал уже не столь ограничен репродуктивным возрастом, как прежде. Теперь есть возможность сохранить свой генетический материал в криобанке и воспользоваться им при необходимости, избежав при этом риска многоплодия

Не менее важно и то, что криопроцедура стала доступней для большего числа людей

Методы криоконсервации

Основную проблему во время криоконсервации представляет внутриклеточная жидкость. При замораживании она способна превращаться в кристаллы льда, которые могут повредить структуру клеток при размораживании. Поэтому, главная задача во время криоконсервации – избежать формирования внутриклеточного льда.

Для этого применяют два способа:

• Медленный способ. Этот способ заключается в медленном удалении жидкости из клетки (дегидратация).
• Быстрый способ (витрификация). Возникновение кристаллизации не допускается путем образования стекловидных структур.

У каждого из вышеуказанных методов есть свои преимущества и недостатки. Выбор способа заморозки будет зависеть от типа клетки или ткани и их биологических характеристик.

День процедуры заморозки спермы

Вам следует уделить некоторое время для консультации нашим специалистом прежде чем вы сдадите свою сперму для замораживания в нашу клинику. Эта встреча предполагает обсуждение рисков и последствий связанных с замораживанием вашего образца в нашей клинике.

Форма вашего согласия и стандартная декларация должны быть подписаны до того как EmBIO клиника примет ваш образец. Оба документа будут выданы вам до процедуры для ознакомления. Пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к персоналу если у вас есть какие либо вопросы на любом этапе процедуры.

Партнерша не получает результатов анализа вашего образца,если это не оговорено и не подтверждено заранее в документах. По умолчанию результаты могут быть выданы только лицу, предоставляющему образец. Таким образом сохраняется абсолютная конфиденциальность.

По правилам клиники EmBIO, только человек, чей образец был заморожен контактирует со специалистом для получения результатов анализа и завершения процедуры заморозки. Официальный отчет будет отправлен вашему врачу только в случае вашей просьбы.

Вам нужно перевезти замороженные эмбрионы или клетки для дальнейшего лечения ЭКО в другую клинику?

Очевидно, что вас больше всего интересует в этом плане. Безопасна ли крио- транспортировка эмбрионов и клеток?

Многие пары, проходящие лечение от бесплодия, оказываются в ситуации, когда они решают перевезти свои замороженные эмбрионы или клетки из одной клиники в другую по разным причинам. Будь то потому, что они хотят получить дальнейшее лечение в другом центре, или они выбирают место назначения, которое предлагает возможность лечения, в данном случае недоступное в их стране, или по простой причине переезда. И эти пары, конечно, спрашивают, действительно ли криотранспорт безопасен для клеток.

Указанный процент успеха клиник показывает, что нет разницы в успешности беременности между циклами ЭКО с эмбрионами, которые возникли и использовались для цикла лечения в клинике с теми, которые перевозились для дальнейшего лечения из своего места происхождения в другое.

Единственное необходимое условие для безопасной транспортировки эмбрионов и клеток — это выбор квалифицированного курьера, который непосредственно специализируется на криотранспортировке клеток.

ТРАНСПОРТИРОВКА КЛЕТОК ЗАМОРОЖЕННЫХ С ПОМОЩЬЮ ВИТРИФИКАЦИИ

Криотранспорт — это транспортировка замороженных эмбрионов или клеток методом витрификации.Витрификация — это современный метод криоконсервации эмбрионов, яйцеклеток и спермы. Для длительного хранения замороженные клетки хранят в криоконтейнерах, заполненных жидким азотом. Температура жидкого азота -196 градусов по Цельсию. При такой очень низкой температуре все биологические процессы в клетках приостанавливаются, и яйцеклетки, сперма и эмбрионы могут храниться десятилетиями и по-прежнему использоваться.

Во время хранения замороженных клеток абсолютно необходимо поддерживать стабильную внутреннюю температуру криоконтейнера и предотвращать любое нежелательное разрушение или повреждение сосуда. То же правило касается криотранспорта. Транспортируемые витрификованные клетки хранятся в криоконтейнерах, специально предназначенных для транспортировки.

ПРИНИМАЮТ ЛИ ВСЕ КЛИНИКИ ЭМБРИОНЫ И КЛЕТКИ ИЗ ДРУГИХ КЛИНИК?

То, получает ли клиника клетки из другого центра, на самом деле является показателем того, насколько экспертным и профессиональным является этот центр ЭКО, как отправляющее учреждение, так и принимающее учреждение. В ведущих клиниках уже внедрены процедуры транспортировки замороженных клеток и эмбрионов и есть опыт их отправки или получения.

Однако главным звеном в процессе транспортировки является курьер, с которым вы решаете перевезти свои клетки. Только курьеры, специализирующиеся на крио-транспортировке, могут гарантировать безопасную транспортировку, оперативно связаться с обеими клиниками, чтобы ускорить процесс, предоставить всю сопутствующую документацию и лично контролировать контейнер от получения до доставки клеток, которые они ни на минуту не оставят без присмотра.

ВАШ КУРЬЕР ЗАМОРОЖЕННЫХ КЛЕТОК

В области транспортировки замороженных клеток лучшие специалисты по логистике, такие как BioCourier, с многолетним опытом и множеством завершенных поставок, сосредотачиваются на превосходной ориентации в законодательстве и нормативных актах каждой страны, работают с клиниками по всему миру, могут предвидеть или оперативно решать любые проблемы, которые могут возникнуть во время транспортировки, прошли обучение по безупречному обращению с криоконтейнером для обеспечения максимальной безопасности транспортируемого материала, и используют новейшие технологии для предотвращения повреждения ваших ценных эмбрионов и клеток.

Ответ на основной вопрос о том, безопасна ли транспортировка замороженных эмбрионов и клеток, ясен: с опытным и профессиональным перевозчиком, специализирующимся на криотранспортировке, ДА.

Подготовка к анализу спермы

Для того чтобы получить наиболее точный результат, важно учитывать следующее:

Требуется период воздержания от полового контакта в течение 2 — 4 дней:
Широко распространено заблуждение, что качество спермы улучшается, если воздерживаться от полового контакта. В действительности, воздержание более чем 7 дней может привести к увеличению числа мертвых и анормальных сперматозоидов. В то же время также не стоит быть чрезмерно поспешным — срок в менее чем 2 дня со дня последнего полового контакта может привести к неточным данным о количестве сперматозоидов.

Образец должен быть собран во всем объеме:
Иногда не удается собрать весь образец в контейнер

Если это происходит, очень важно, чтобы сотрудник EmBIO был предупрежден. Первая часть эякулята зачастую наиболее богата сперматозоидами и если не удается ее собрать, результат теста может быть неточным.
Образец должен быть доставлен в EmBIO в течение 1 часа после его получения: чем дольше сперма остается не отделенной от семенной жидкости тем более неточны результаты анализа.

Образцы до заморозки должны хранится при комнатной температуре:
Не стоит нагревать либо охлаждать образец, комнатная температура является наиболее оптимальной

Убедитесь, что крышка контейнера надежно закрыта.

Используйте подходящую емкость для сбора спермы:
Это важно, так как неверно выбранный контейнер может сделать результаты испытаний недействительными. Вы будете обеспечены соответствующим контейнером в клинике EmBIO, либо сможете купить его в аптеке, если вы собираетесь проводить процедуру у себя дома.

История метода

В 1973 году появились сенсационные публикации о том, что британским эмбриологам Wilmut и Rowson удалось вывести первого сельскохозяйственного животного (теленка), родившегося после переноса замороженного эмбриона.

Появление криодетей

В 1983 году в Австралии была зарегистрирована первая беременность, наступившая при переносе “оттаянного” криоконсервированного человеческого эмбриона. Это случилось благодаря усилиям мельбурнских эмбриологов Alan Trounson и Linda Mohr. Правда, на десятой неделе произошел самопроизвольный аборт. В следующем году в Нидерландах было зафиксировано первое живорождение после криоконсервации эмбрионов.

Стоит также отметить, что в 1978 году, за 6 лет до этого, индийский врач Subash Mukhopadyay из Калькутты сообщил об успешной криоконсервации 8-клеточного эмбриона, который хранился в замороженном состоянии в течение 53 дней и после “оттаивания” был перенесен в материнский организм. Это привело к успешной беременности и живорождению уже в том же 1978 году.

Появившейся на свет ЭКО-девочке дали имя Дурга в чести индийской богини победы. Она родилась всего на 67 дней позже первого в мире ЭКО-ребенка из Великобритании. Д-р Mukhopadyay подвергался преследованиям со стороны властей, и это не позволило ему поделиться своими достижениями с международным научным сообществом.

Оптимизация технологий

С развитием клинического применения ЭКО в начале 1980-х годов были приложены значительные усилия по совершенствованию способов замораживания эмбрионов человека. В это время появились первые публикации, сообщающие о живорождениях после использования криопротекторов, таких как ДМСО, пропандиол и сахароза. Данные методы оказались более надежными и получили широкое распространение.

В 1949 году английский биолог E. J. C. Polge и его коллеги случайно обнаружили криопротекторный эффект глицерина. Оказалось, что это вещество защищает от образования кристаллов при замораживании посредством клеточной дегидратации. Данное открытие привело в 1953 году к успешной криоконсервации спермы сельскохозяйственных животных, а в 1964 году появились первые криобанки для хранения спермы человека.

Было замечено, что криопротекторы могут быть токсичными для клеток. Поэтому на протяжении многих лет шел неустанный поиск менее опасных и более эффективных протекторов, а также их комбинирование с целью снижения индивидуальной концентрации и токсичности.

Витрификация

Свой вклад в дело “приручения холода” внесли в 1985 году американские биологи W. F. Rall и J. M. Fahy. Им удалось успешно витрифицировать раствор относительно большого объема (0,25 мл), содержащий эмбрионы мыши со смесью ДМСО, ацетамида и полиэтиленгликоля, поместив его в жидкий азот.

Это достижение привело к пониманию того, что сокращение срока нахождения клеток в витрифицированном растворе уменьшает его токсичность. Следующим шагом стала замена ДМСО этиленгликолем и смесями нескольких криопротекторов. К концу 1990-х годов витрификация была применена для человеческих эмбрионов (как на стадии бластоцисты, так и на стадии дробления) с достижением живорождения.

Изобретение криотопа

Впервые появившиеся в Японии уникальные носители замораживаемого биоматериала — криотопы — стали прорывом, который позволил внедрить витрификацию эмбрионов в клиническую практику. Конструкция криотопа — полузакрытой сверхнадежной микросоломинки со специальной защитной средой — позволяет замораживать на сверхскорости минимальные объемы биоматериала, что приводит к высоким показателям выживаемости и живорождения.

Массовое внедрение

С 1984-го по 2008-й год, по разным оценкам, родилось от 350 000 до 500 000 ЭКО-детей, появившихся на свет из эмбрионов, замороженных с контролируемой скоростью, а затем хранящихся в жидком азоте. Кроме того, несколько сотен родов за этот же период состоялись благодаря витрификации ооцитов. В настоящее время темпы рождаемости “криодетей” сохраняются.

Зачем проводится криоконсервация

Криоконсервация генетического материала осуществляется для его использования через некоторое время или предоставления бесплодным парам.

Криоконсервация генетического материала показана в следующих случаях:

• Невозможность присутствия биологического отца для предоставления спермы в день пункции яичников. Во время процедуры ЭКО яйцеклетки начинают оплодотворять после пункции в этот же день. Поэтому забор спермоматериала проводят параллельно. Если в планируемую дату отец не сможет присутствовать в клинике (командировка, лечение и пр.), его сперму предварительно замораживают.
• Участие в программе донорства. Донорский спермоматериал используют бесплодные пары, одинокие женщины, которые решили родить ребенка, а также люди с генетическими заболеваниями, которые могут передаваться по наследству. В этом случае донорский материал – единственная возможность стать родителями здорового ребенка. Для этих же целей используют донорские яйцеклетки.
• Онкологические заболевания. Лечение злокачественных опухолей подразумевает использование препаратов и процедур, которые имеют значительные побочные эффекты (химиотерапия, лучевая терапия). Одним из таких эффектов является появление бесплодия. Поэтому перед началом проведения лечения, пациент может осуществить криоконсервация эмбрионов или спермоматериала. После выздоровления пациенты смогут иметь детей благодаря этой процедуре.
• Необходимость отсрочить процесс беременности. В некоторых ситуациях мужчина или женщина не планируют заводить ребенка именно сейчас. Однако, чтобы «подстраховаться на будущее», они проводят криоконсервацию эмбрионов или сперматозоидов.

С помощью криоконсервации генетического материала можно провести процедуры вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО, ИКСИ, искусственная инсеминация и т.д.) в репродуктивной клинике «Центр ЭКО» города Волгоград. Специалисты клиники имеют высокую квалификацию и большой опыт устранения бесплодия.

Часто задаваемые вопросы о процедуре замораживания спермы

Как долго сохраняется замороженный образец?

Практически вечно. Мы можем изъять ваш образец из хранения по следующим причинам:

• Чтобы использовать образец в любом из вариантов процедуры ЭКО (см. выше) по вашему желанию
• Если вы указываете, что вы больше не хотите, чтобы образец хранился в клинике
• Если вы прекращаете платежи за хранение образца в клинике
• После вашей смерти если это одно из требований вашего завещания

Сколько стоит хранение замороженной спермы?

Ежегодный взнос за хранение образца спермы либо эмбрионов в клинике EmBIO составляет 200 евро.

Что еще вы хотели бы узнать о замораживании спермы?

Спросите доктора Парасхоса: paraschos@ivf-embryo.gr

Криопротокол по ОМС

В 2018 году в услуги ЭКО, которые можно провести в рамках ОМС, включили две программы — криоконсервацию эмбрионов и половых клеток (яйцеклетки и сперматозоиды) и перенос оттаянных эмбрионов. Приказ вступил в силу с 11.03.2018. Таким образом, в настоящее время пара может рассчитывать на следующие процедуры, которые оплатит ОМС:

• обследование, подготовка и вступление в программу ЭКО;
• стимуляция суперовуляции;
• контроль созревания ооцитов и их пунктирование;
• непосредственно искусственное оплодотворение, в том числе с помощью ИКСИ;
• культивирование эмбрионов и подсадка их в полость матки;
• процедура криоконсервации эмбрионов высокого качества;
• разморозка и подсадка эмбрионов в случае неудачной первой попытки. Подготовка эндометрия к имплантации, контроль размороженных эмбрионов и осмотр врача оплачиваются самостоятельно. Подготовка к имплантации осуществляется на базе женской консультации.

Помимо этого, есть возможность криоконсервации за счет средств ОМС сперматозоидов и яйцеклеток. Показанием к такой процедуре может стать проведение химиотерапии и лучевой терапии при борьбе со злокачественными новообразованиями.

Обратите внимание! Хранение криоконсервированных эмбрионов и гамет оплачивается пациентами самостоятельно. Чтобы провести повторную подсадку криоконсервированных эмбрионов за счет ОМС, необходимо получение повторного направления в Минздраве

В каждом регионе есть свои правила и возможности проведения криоконсервации по ОМС. Необходимую информацию уточняйте в женской консультации или центрах репродуктивного здоровья.

Какие возможности дает применение криопротокола?

• Обеспечивает надежную и безопасную консервацию высококачественных эмбрионов, неиспользованных для подсадки. В настоящее время идет тенденция к тому, что в будущем криопротокол станет необходимым и рутинным этапом ЭКО.
• Дает возможность транспортировать эмбрионы на большие расстояния.
• Снижает риски многоплодной беременности. Для подсадки используется один эмбрион, а оставшиеся замораживают и подвергают хранению. Если беременность не наступила, есть возможность использовать другой зародыш в следующем менструальном цикле.
• Отсроченный этап подсадки позволяет женщине восстановиться после стимуляции яичников, что увеличивает шансы наступления беременности.
• Дает возможности для донорства эмбрионов.

Суть процедуры

Криоконсервация эмбрионов — сохранение их при минусовых температурах, как правило, на стадии развития, соответствующей предимплантационной, то есть от момента оплодотворения до образования бластоцисты.

Принцип криоконсервации основан на сохранении жизнеспособности клеток в состоянии анабиоза путем повышения внутри- и внеклеточной вязкости до уровня, на котором останавливаются все молекулярные диффузии и химические процессы.

Криоконсервация эмбрионов обычно выполняется как компонент экстракорпорального оплодотворения. Заморозке подвергают эмбрионы, оставшиеся после предыдущего цикла. “Оттаявший” генеративный биоматериал не теряет своих первоначальных качеств и в любой момент пригоден к использованию.

Роль криопротекторов

Чтобы предотвратить повреждение замораживаемых клеток, протоколы криоконсервации направлены на обезвоживание внутриклеточного пространства и, как следствие, минимизацию внутриклеточного образования льда при сохранении низких концентраций внутриклеточных солей.

Процесс дегидратации смягчается путем добавления в замораживающую среду криопротекторов. В дикой природе многие биоорганизмы вырабатывают подобные вещества для защиты от разрушительного воздействия экстремально низких температур. Так, собственные криопротекторы (антифризовые белки и соединения) помогают арктическим и антарктическим амфибиям, рыбам и насекомым свести к минимуму повреждения от морозов в холодные зимние периоды.

Криопротекторы при заморозке репродуктивного человеческого биоматериала также выполняют роль антифриза, разрушающего водородные связи в воде. Различают два вида криопротекторных агентов:

внутриклеточные, способные проникать в клетку и непосредственно вытеснять воду из нее (например, диметилсульфоксид (ДМСО), этиленгликоль, пропандиол);

внеклеточные, которые остаются вне клетки и выводят воду из нее осмосом (например сахароза, поливиниловый пирролидон, гидроксиэтил крахмал, декстран).

К дополнительным эффектам криопротекторов относятся:

компенсация повышенного содержания внутриклеточных солей, которое может быть смертельно опасным;

снижение температуры замерзания раствора, приводящее к сокращению внутриклеточного образования льда (при добавлении высокой концентрации криопротектора);

защита мембран клеток от радикальных трансформаций при переходе из одного физического состояния в другое.

Каждый тип клетки имеет конкретную оптимальную скорость охлаждения. Она определяется отношением объема клетки к площади поверхности, а также проницаемостью мембраны для воды и криопротекторов.

Если скорость охлаждения (снижение температуры в течение определенного периода времени) низкая, клетки имеют достаточное время для потери воды и достижения максимальной дегидратации, что приводит к минимальному образованию кристаллов льда. И наоборот, при высокой скорости охлаждения время для перемещения воды из клеток ограничено, и риск образования кристаллов льда возрастает.

Способы заморозки

Все методы криоконсервации можно разделить на две группы:

медленную заморозку;

витрификацию.

Хотя первый из них (приведший к живорождению в 1984 году) все еще применяется в клинической практике, в последние годы наметился явный переход ко второму, который начал успешно использоваться с 1990 года и в дальнейшем продемонстрировал значительное улучшение показателей в плане выживаемости и имплантации. Предполагается также, что витрификация снижает риск повреждения ДНК.

Оба криопротокола используют аналогичные химические вещества, но сильно различаются по их концентрации, а также по темпам охлаждения и нагревания.

При медленной заморозке применяют:

относительно невысокие концентрации криопротекторов;

низкие скорости охлаждения;

быстрые темпы нагревания.

При витрификации используют:

высокие концентрации криопротекторов;

сверхбыстрое охлаждение;

Зачем нужна заморозка спермы — криоконсервация?

На самом деле заморозка спермы вне программ ЭКО – довольно частое явление. Это обусловлено повышением информированности населения о возможности заморозить мужские половые клетки на длительный срок без ущерба для их качественных характеристик.

Необходимость криоконсервации спермы возникает в таких случаях:

• Перед лечением онкологических заболеваний любого органа, включая лимфатическую систему и органы кроветворения. Об этой патологии подробно говорилось в предыдущей статье.
• Некоторые виды спорта достаточно травматичны. Исключить повреждение яичек нельзя и в повседневной жизни. Поэтому к услугам хранения замороженной спермы часто прибегают спортсмены и люди, деятельность которых сопряжена с риском.
• Хирургические вмешательства на половых органах мужчины, например, вазорезекция (пересечение семявыносящих путей с целью контрацепции). Эта операция приводит к стойкому бесплодию.
• Имеет смысл замораживать сперму пациентов с поврежденным спинным мозгом, так как в 95% случаев теряется способность к эякуляции.

При перечисленных патологиях эякулят — сперму для заморозки сдают несколько раз, с перерывом в 2–3 суток, до накопления достаточного количества спермы или производится заморозка сперматозоидов единичных, которые могут быть выделены. Тогда методика усложняется – требуется увеличение временных затрат и усилий.

В программах ЭКО, суррогатного материнства, внутриматочной искусственной инсеминации и экстракорпорального оплодотворения для одиноких женщин по показаниям также может использоваться сперма после криоконсервации. Причем для процедур используют предварительно замороженные сперматозоиды мужа или донора (после их разморозки).

Предварительно заморозить сперму мужа можно, если он не сможет находиться в репродуктивном центре во время проведения процедуры экстракорпорального оплодотворения или инсеминации.