Что такое пцр? о методе полимеразной цепной реакции

Эффективность диагностики инфекций

ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.

Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Для выявления каких инфекций используется метод ПЦР?

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.).

В урологической и гинекологической практике —

• для выявления хламидиоза,
• уреаплазмоза,
• гонореи,
• герпеса,
• гарднереллёза,
• микоплазменной инфекции,
• ВПЧ — вирусов папилломы человека;

В пульмонологии —

• для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний,
• туберкулёза;

В гастроэнтерологии —

для выявления хеликобактериоза;

В клинике инфекционных заболеваний —

• в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза,
• дифтерии,
• вирусных гепатитов В, С и G;

В гематологии —

• для выявления цитомегаловирусной инфекции,
• онковирусов.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции.

При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу.

Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь.

При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева.

Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала.

Кровь сдается натощак утром.

Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер.

Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Особенности и недостатки метода

Безусловно, ПЦР не идеальный метод, и у него имеются свои недостатки. Но они напрямую связаны с его достоинствами и с тем, что называется «человеческим фактором».

• ПЦР – высокотехнологичный метод, требующий соблюдения строжайших правил устройства и оснащения  лаборатории. Достаточно сказать, что на рабочем месте, где происходит приготовление и раскапывание смесей по пробиркам, должен быть установлен фильтр биологической очистки со степенью более 99%.  Это связано с тем, что в воздухе постоянно присутствует невероятный коктейль из фрагментов ДНК всевозможных живых организмов. И если в процессе подготовки к проведению реакции, образец будет загрязнен — возможно «ложное срабатывание».
• С другой стороны, далеко не всегда положительный результат ПЦР означает наличие заболевания. Например, человек пролечился от какого-либо заболевания, но погибший и уже не опасный возбудитель (фактически его останки) будет еще некоторое время находиться среди клеток крови и «разбираться на запчасти» защитной системой организма. Если в этот момент сделать ПЦР – результат окажется положительным.
• Другой вариант – это отрицательный результат ПЦР при наличии даже явной клинической картины. Одна из наиболее возможных причин – материал для исследования был взят «не оттуда». Образец должен брать квалифицированный врач, строго следуя инструкции, которую ему дает лаборатория.
• При создании праймеров используют специфичный для данного микроорганизма фрагмент ДНК, наименее подверженный изменениям. Он выбирается из так называемой высоко консервативной области ДНК. Но изменчивость микроорганизмов может приводить к тому, что некоторые генотипы или штаммы исследуемого возбудителя могут приобретать и накапливать мутации в амплифицируемом (клонируемом) участке генома, и становиться неуловимыми для данного праймера, и тест-системы, в целом. Таким образом, различные тест-системы — одна из причин, почему анализы, сделанные в разных лабораториях и в разных клиниках «одним и тем же» методом ПЦР могут показывать разные результаты. Чтобы максимально избежать ошибок по вине мутаций, современные стандарты качества, регламентируют объем испытаний тест-системы, прежде чем она попадет на рынок и будет использована для диагностики. Эти испытания включают проверку на перекрестные реакции, а также тестирование всех известных штаммов определяемого возбудителя.

Полный список исследований методом ПЦР и цену на них  можно посмотреть в разделе «»
 

Анализ крови методом ПЦР

ПЦР (полимеразная цепная реакция) является одним из высокоточных методов, с помощью которого осуществляют диагностику инфекций различного характера, а в его основе лежит изучение генетических образцов материала человека. Разнообразные виды исследований по этой методике осуществляются на основе таких биологических материалов, как кровь, слюна, мокрота и другие.

Достоинства ПЦР – диагностики

Диагностика различных заболеваний инфекционного характера с помощью метода ПЦР имеет определенные преимущества:

• Определение прямых возбудителей инфекционного заболевания.
• Большинство методов, используемых для диагностики в современной медицине, предполагают определение заболевания на основе косвенных признаков. Благодаря методу ПЦР можно сразу выявить специфический участок ДНК возбудителя болезни на основе генетического материала больного;
• Повышенная чувствительность ПЦР.
• Использование этого метода позволяет выявить инфекцию даже тогда, когда генетический материал содержит всего лишь одну клетку бактерии или вируса.
• Подходит для проведения диагностики различных видов инфекций.
• Благодаря высокой чувствительности метода ПЦР можно провести диагностику не только заболеваний в острой стадии своего развития, но и хронических инфекций.
• Возможность получения быстрого результата.

Для проведения полной диагностики исследуемого материала методом ПЦР необходимо 3-5 часов, в то время как использование культуральных методов предполагает затрату гораздо большего времени от 2-3 дней до нескольких недель.

Особенности проведения анализа крови методом ПЦР

Для получения достоверных результатов лабораторной диагностики методом ПЦР решающими факторами являются опыт и профессионализм врача — лаборанта, создание соответствующих условий для проведения анализа в данной лаборатории, а также правильная подготовка самого пациента к проведению этой процедуры.
Процесс анализа крови методом ПЦР включает в себя следующие этапы:

• перед посещением исследовательской лаборатории пациент должен отказаться от употребления любой пищи, воды и даже жевательной резинки;
• для забора крови из локтевой вены используется одноразовая игла, специальная вакуумная упаковка Vacutainer, а в качестве консерванта используется ЭДТА. Запрещено применение других веществ в качестве антикоагулянта;
• забранную кровь помещают в пробирку и закрывают пробкой, после чего емкость необходимо перевернуть несколько раз для смешивания с антикоагулянтом;
• до проведения исследования пробирка с содержимым должна храниться в холодильнике.

Для диагностики каких заболеваний используется метод ПЦР

Анализ крови методом ПЦР используется для выявления таких инфекций:

• гепатит В и С. Необходимость проведения этого метода заключается в том, что для гепатита характерен длительных инкубационный период и угроза серьезных последствий, среди которых может быть и летальный исход;
• такие заболевания, как уреаплазмоз, микоплазмоз, трихомониаз передаются половым путем и имеют скрытый характер течения болезни. Именно этот метод позволяет с точностью выявить возбудителя заболевания, а также предотвратить развитие таких неприятных явлений, как бесплодие, простатит, рак шейки матки;
• герпес является довольно опасным и устойчивым заболеванием, которое долгое время может находиться в режиме не активности. Обычные методы исследования не дают возможности поставить точный диагноз этого заболевания, что может привести к поражению центральной нервной системы и развитию менингита и энцефалита.

Именно проведение анализов методом ПЦР позволяет выявить болезнь в самом начале ее развития, что значительно ускоряет процесс выздоровления больного, а также избавляет его от развития серьезных осложнений.

Важность клинической диагностики ВИЧ

В понимании многих людей ВИЧ-инфицированный человек выглядит болезненно, изнеможенно. Он кашляет, чихает, чешется, стонет, у него все болит… На самом деле это не так! Проблема в том, что после инфицирования ВИЧ и в последующий инкубационный период симптомы полностью отсутствуют. Затем наступает острая фаза, на протяжении которой присутствуют симптомы, напоминающие ОРВИ или грипп. Но и они вскоре проходят, и наступает, так называемый, латентный период – продолжительный промежуток времени, когда ВИЧ-инфекция себя ничем не выдает. С момента инфицирования и до стадии пред-СПИДа может пройти порядка 10 лет, в течение которых, ни сам пациент, ни его окружение, даже и не подозревают о болезни. А когда она уже на полную мощность заявляет о себе, контролировать ее очень трудно. Сложно противостоять осложнениям ВИЧ, поддерживать практически разрушенную иммунную систему человека.

Очень важно понимать, что, хотя и есть группы риска – гомосексуалисты, наркозависимые и девушки легкого поведения – в основной массе, пациенты с ВИЧ-инфекцией – это обычные люди. Они учатся, ходят на работу, посещают общественные места, знакомятся в интернете – в общем, живут как все

К сожалению, но от ВИЧ никто не застрахован. Незащищенный половой контакт в порыве страсти, заветное тату без соблюдения стерильности, маникюр за полцены у начинающего мастера, уличная драка – все эти и множество других житейских ситуаций могут обернуться инфицированием ВИЧ.

Не ошибается лишь тот, кто не живет! Мы не можем знать все наперед, не можем исправить уже совершенных ошибок, но мы можем предпринять простые шаги для исправления их последствий – обратиться в ближайший кожно-венерологический диспансер, в местную клинику или специализированный СПИД-центр для сдачи анализов и ранней диагностики ВИЧ.

Чтобы понять суть Real-time PCR, необходимо имеет представление о том, какие процессы проходят в пробирке во время «обычной» ПЦР.

ПЦР представляет собой реакцию амплификации молекул ДНК. Рассмотрим два случая, когда в исследовательской практике возникает необходимость амплифицировать (то есть увеличить во много раз) количество ДНК в образце

Например, для судмедэксперта важно размножить небольшое количество ДНК, которая была найдена на месте преступления. Либо исследователю нужно сравнить два образца и узнать, в каком из них больше ДНК

Для такого рода анализа необходимо, чтобы в образце было достаточно ДНК для ее детекции. Если ДНК слишком мало, в сравниваемых образцах проводят ПЦР при одних и тех же условиях, и по количеству амплифицированного продукта определяется, в каком из образцов было больше ДНК изначально.

Главным веществом, благодаря которому происходит ПЦР, является термостабильная ДНК-зависимая ДНК-полимераза. Этот фермент синтезирует цепочку ДНК из свободных нуклеотидов, содержащихся в реакционной смеси (dNTPs), по принципу комплементарности. Матрицами для создания новых цепочек являются исследуемые молекулы ДНК. Важный момент – ДНК-полимераза «работает» на одноцепочечной ДНК, при этом «точка старта» для нее может быть только на двухцепочечной ДНК.

Именно эта особенность данного фермента позволяет амплифицировать только те фрагменты ДНК, которые интересны исследователю, а не весь геном организма сразу. Для этого в реакционную смесь добавляют небольшие фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), называемые праймерами (англ. primer, то есть «первичные»). Они присоединяются (отжигаются) на матричную молекулу ДНК вокруг исследуемого гена, запуская работу полимеразы в нужном направлении.

Контроль ПЦР обеспечивается благодаря смене температуры образцов – за счет этого обеспечивается регуляция активности фермента и присоединения праймеров.

Для того, чтобы начать реакцию, температуру повышают до 95°C. При такой температуре двухцепочечная ДНК денатурирует до одноцепочечной.

Потом температуру понижают до ~60°C. Это позволяет праймерам присоединиться вокруг исследуемого фрагмента.

Таким образом, у полимеразы появляется точка старта, от которой она может начинать синтез новой цепочки ДНК:

Оптимальная температура для работы ДНК-полимеразы составляет 72°C, поэтому на этом этапе цикла (он называется элонгацией) температура образца повышается до 72°C, для того, чтобы фермент работал с максимальной скоростью.

По окончанию цикла мы получаем в 2 раза больше ДНК, чем было в начале.

Такие температурные изменения повторяются по кругу в течение 40 «циклов». То есть, из одной копии ДНК получаются две, из двух – четыре, из четырех – восемь и так далее, пока их количество не будет исчисляться миллиардами.

После амплификации полученную ДНК можно разделить на агарозном геле и окрасить (визуализировать). Чем ярче будет полоса на геле, тем большее количество копий нужных нам генов получилось в результате реакции.

Когда и кому нужно сдавать анализ крови на гельминтоз

Печальная медицинская статистика свидетельствует о том, что примерно для каждого 3 человека проблема гельминтов сегодня является актуальной. Бытовой транспорт, офисы и учебные заведения, немытые овощи и фрукты, рукопожатия все эти привычные для каждого взрослого и ребенка дела и становятся основным источником заражения паразитами. Даже если симптомы и не проявляются сразу, в любом случае паразиты оказывают крайне негативное влияние на человеческий организм: вызывают ухудшение аппетита, способствуют развитию аллергией, болей в поврежденном органе, плохому пищеварению, иногда способны вызвать смерть. Учитывая это, нужно сдать на паразитов анализы каждому человеку (желательно каждый год).

Нельзя оттягивать с обследованием, если уж проявляются характерные для гельминтоза симптомы:

• резкая потеря веса;
• крапивница;
• частая тошнота;
• отвращение к пище;
• резкое снижение гемоглобина;
• раздражительность или бессонница у детей.

Кроме того, можно назвать также группы людей, которые обязательно каждые 6-8 месяцев должны проверять кровь. К таким, в частности относятся:

• лица, проживающие в местностях с частыми вспышками гельминтоза;
• те, кто работают в образовательных учреждениях и имеют дело с маленькими детьми;
• медицинские работники;
• все работники общепита;
• лица, работающие с животными, а также члены их семей (ветеринары, работники мясокомбинатов, пастухи, собаководы, работники цирка и зоопарка и т. д.).

Кроме того, анализ крови на глисты должны сдавать все дети школьного и дошкольного возраста, которые в ближайшее время должны посещать учебное заведение, кружки. Исследовать кровь на паразитов должны беременные, дети накануне вакцинации. Кроме того, повторные анализы стоит сдавать после пройденного курса лечения от паразитов.

Как подготовиться к ПЦР тесту на коронавирус

Наиболее распространенными вопросами по подготовке к тесту на коронавирус являются следующие:

• Пцр тест – можно ли есть;
• разрешается ли курить и употреблять алкоголь;
• чего нельзя делать перед анализом на коронавирус ни в коем случае;
• что нужно для ПЦР теста, чтобы результат был достоверным.

В подготовке к ПЦР тесту на коронавирус нет ничего сложного. Но существует несколько требований, которые необходимо соблюдать. Ведь от грамотного подхода зависит достоверность полученного результата.

Можно ли есть или пить

Непосредственно перед проведением процедуры по забору биоматериала пить и есть нельзя. ПЦР-тест будет достовернее, если анализы взяты через 3-4 часа после еды.

Вместе с пищей зараженные частицы снимаются с поверхности слизистых оболочек. И в пробирку попадает минимальное количество зараженных клеток. Пить воду тоже не рекомендуется. Она смывает следы инфекции.

Для эффективной диагностики врачи советуют воздержаться от:

• чая;
• кофе;
• соков;
• любых горячих напитков.

Все эти вещества могут исказить результат ПЦР-теста.

Применение лекарственных средств

Категорически неприемлемо использование капель, спреев, антисептиков для горла и носа. Прием таблеток и лекарственных сиропов для лечения кашля следует исключить. Все они снижают количество вирусных частиц, что приводит к ложным результатам ПЦР-анализа.

Употребление алкоголя

За 24 часа до предполагаемого исследования следует отказаться от употребления любых алкогольных напитков. Содержащийся в алкоголе этанол (этиловый спирт 40-45%), полную дезинфекцию не даст, но общую картину испортит. Результат теста вряд ли будет достоверным.

Курение и ПЦР-тест

Табакокурение также приводит к тому, что тест на коронавирус становится неинформативным, и машина выдает неправильный результат ПЦР-исследования.

Гигиенические процедуры

К таким мероприятиям относится чистка зубов, полоскание горла и промывание носа. Если пациент хочет получить истинный результат теста на коронавирус, следует за несколько часов до забора биоматериала отказаться от гигиенических процедур. Также запрещается применять жевательную резинку в качестве очищающего средства ротовой полости.

Использование косметики

Перед ПЦР тестом можно применять косметические средства (губную помаду, блеск, бальзам). Мазок для анализа берется не изо рта, а из глотки (зева) и носа

Если соблюдается осторожность и не допускается соприкосновение губ и прибора для взятия мазка, то присутствие косметики не может помешать. Но если помада случайно смешивается с биологическими частицами, это может замедлить реакцию ПЦР

Лучше нанести косметические средства для губ после процедуры.

Применение ПЦР

Области применения полимеразной цепной реакции как современного метода молекулярной биологии разнообразны. Во многом это обусловлено широтой материала, который можно анализировать (практически все, из чего можно выделить более-менее качественую ДНК может стать объектом исследования), а также подобранных праймеров. Основные области применения ПЦР:

клиническая медицина

• диагностика инфекционных заболеваний
• диагностика наследственных заболеваний
• выявление мутаций
• генотипирование
• клеточные технологии
• создание генетических паспортов

экология

• мониторинг состояния окружающей среды
• анализ продуктов питания
• анализ генетически-модифицированных организмов (ГМО)

научные исследования (молекулярная биология, генетика)

Организация лаборатории ПЦР

• Общая информация по организации ПЦР-лабораторий
• Требования к организации помещений для лаборатории ПЦР
• Главная проблема лабораторий ПЦР
• Классическая ПЦР-лаборатория
• ПЦР в модификации FLASH
• Расходные материалы в ПЦР-лаборатории
• Нормативно-правовые документы по ПЦР

Наименование	Объем	Производство	Метод	Кат.Номер
PrecisionShuttle pTUNE Индуцируемый Вектор		OriGene		PS100021
Вода без нуклеаз		—		R0582
Наконечники Vertex на 10 мкл, с фильтром, бесцветные, градуированные, стерильные, 96 шт/штатив		SSI		SSI-4117NSFS
Наконечники Vertex на 10 мкл, с фильтром, удлиненные, бесцветные, градуированные, стерильные, 96 шт/штатив		SSI		SSI-4137NSFS
Ноутбук с предустановленным специализированным программным обеспечением (для ДТ-96, ДТ-322, Джин-4, Джин)		ДНК-Технология	ПЦР в реальном времени	I-PC/01
ПЦР-Буфер-Б для Taq ДНК-полимеразы, 10х, объём 0,5 мл	0,5 мл	Синтол		B-009
Устройство для запечатывания микропланшет»ДТпак»		ДНК-Технология	ПЦР в реальном времени	O-DTPACK

Другие методы диагностики

Если с помощью 1 метода выявить гельминтоз не удается, врач рекомендует дополнительные лабораторные исследования:

1. Серологический анализ. Тоже относится к иммунологическим вариантам, как и ИФА. Однако, в отличие от последнего, первый имеет своей целью исследовать не кровь, а сыворотку. Для того чтобы получить информацию, врачу необходимо использовать реакцию между антителами и антигенами. Серологический анализ не выполняется для всех видов гельминтов, а только того, на который у врача есть подозрение. Если в теле человека есть паразит, специалист заметит четкую реакцию.
2. ПЦР-диагностика. Не дает возможности выяснить стадию развития глистной инвазии, и не рекомендована при установлении всех видов паразитов. С ее помощью можно выяснить только, присутствуют ли в человеческом теле простые гельминты. Основная задача лаборанта в таком случае поиск ДНК и РНК паразита. При этом не играет никакой роли, будет паразит живым или мертвым. Сдавать на исследование есть возможность любой материал, в частности, мочу, кровь или кал. Для большей достоверности такой анализ может сдаваться несколько раз.
3. Вегетативный резонансный тест. Метод основан на выявлении резонанса между человеческим организмом и препаратом. В качестве последних выступают информационные носители различных видов гельминтов. Все частотные данные каждого вида паразитов были зафиксированы учеными еще в 1989 г. ВРТ (как называется еще этот метод) проводится только в лабораторных условиях и дает возможность выявить, в каком состоянии находится иммунная система человека в конкретный период времени. Так, с помощью ВРТ врач может выяснить, страдает ли организм от аллергии, есть ли на него токсическое, бактериальное, паразитарное влияние или нет.
4. Развернутый анализ крови. Завышенный или, наоборот, заниженный гемоглобин, уменьшено количество эритроцитов, увеличено количество эозинофилов вот основные признаки, которые дают возможность заподозрить присутствие паразита в человеческом теле.

Анализ крови

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

• Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
• Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
• Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
• Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
• Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Другие методы диагностики половых инфекций

В диагностике инфекций передаваемых половым путем (ИППП) также используются следующие методики:

• микроскопия — исследование неокрашенных и окрашенных препаратов в светооптическом микроскопе. Точность метода зависит от опыта врача-лаборанта. Как правило хорошо диагностируются гонококки, трихомонады, гарднереллы и кандиды (бактерии больших размеров). Другие инфекции не видны под микроскопом, так как очень маленького размера.
• бактериология — культивирование (выращивание) инфекций на питательных средах. До практического использования ПЦР, бактериальное исследование считалось «золотым стандартом» в диагностике ИППП, т. е. самым точным методом. Большим плюсом данной методики является возможность определения чувствительности микробов к антибиотикам. Минусом — необходимость быстрой доставки клинического материала в лабораторию, пока микробы не погибли в окружающей среде, не все ИППП растут на питательных средах, необходимость использования качественных питательных сред, сроки получения результатов — 5 — 7 дней.
• иммуноферментный анализ — определение специфических антител (белков), вырабатываемых в ответ на внедрение микробов (антигенов) в сыворотке крови. То есть выявляют не сам микроб, а антитела которые вырабатывает организме человека. Плюсом метода является возможность определение стадии инфекционного процесса (в острой стадии определяются иммуноглобулины (антитела) класса М, в хронической — иммуноглобулины класса G). Минусом — отсутствие выработки антител у пациентов с иммунодефицитом, перекрестная реакция антител со схожими микробами, низкие показатели чувствительности и специфичности. На основании результатов только ИФА без подтверждения другими методами диагностики и при отсутствии клинических проявлений выставлять диагноз не представляется возможным.

Суть метода и когда его назначают

Полимеразная цепная реакция представляет собой способ молекулярной анализа. Частный путь применения ПЦР-диагностики — это выявление всевозможных инфекционных патологий: будь то бактериальные, грибковые или вирусные поражения.

Практический смысл заключается в следующем.

Инфекционные возбудитель в любом случае оставляет в кровеносном русле пациента, на слизистых оболочках часть своего генетического материала.

Врачи берут фрагмент биологической жидкости или иную пробу, после чего с помощью специальных ферментов удлиняют, удваивают существующую ДНК.

И так до тех пор, пока необходимая часть генетического материала не станет достаточно длинной для того, чтобы ее удалось обнаружить с помощью специального детектора.

По результатам можно говорить о развитии того или иного инфекционного поражения, его давности.

ПЦР используется не только для диагностики текущих септических процессов. Есть разные модификации способа. С помощью этого же метода, иммунологической разновидности, можно определить антитела к тому или иному агенту.

Благодаря чему, удается выявить сопротивляемость организма этому конкретному возбудителю, наличие или отсутствие иммунитета. Работа врачей заключается в том, чтобы верно толковать результаты.

С помощью все того же ПЦР можно установить отцовство, определить присутствие наследственных генетических патологий. Это в своем роде уникальная и перспективная методика обследования.

Показаний к назначению анализа полимеразной цепной реакции множество.

Вот лишь некоторые возможные варианты:

• Предполагаемые вирусные инфекции, поражающие печень. Все формы гепатита. На расстройство косвенно указывают такие симптомы: боли в правом боку, нарушения пищеварения, поносы, запоры, тяжесть под ребрами в проекции органа, пожелтение кожи и склер глаз, ощущение горечи во рту, тошнота, рвота, увеличение объемов живота. ПЦР позволяет поставить точку в вопросе. Назначается в первую же очередь.
• Диагностика СПИДа. Определить ВИЧ инфекцию можно несколькими способами. Но полимеразная цепная реакция дает однозначный ответ, практически сразу. Потому именно ПЦР считается предпочтительным вариантом и основной мерой диагностики.
• Венерические инфекции. Обследование проводится в любой момент. В качестве биоматериала забирают мазок со слизистых оболочек уретры.

Методика предоставляет точные результаты. С ее же помощью можно обнаружить ход течения заболевания, давность, наличие иммунитета, сопротивляемость организма.

Проводится параллельно с микробиологическим исследованием или вместо него. Зависит от ситуации.

На венерические инфекции указывают такие симптомы: боли в области половых органов, рези при мочеиспускании, жжение, зуд, выделения гнойного, прозрачного характера с неприятным запахом или без такового, нарушения отхождения урины.

• Герпесвирусные инфекции, папилломатоз. Другими способами определить патологические процессы, ассоциированные с этими возбудителями, не выйдет. Многие из них потенциально опасны. Некоторые штаммы вируса папилломы человека крайне агрессивны, онкогенны. Могут привести к сложным формам рака. Потому так важна ранняя диагностика.
• Злокачественные процессы на начальной стадии. Пока еще симптомов нет. С помощью ПЦР-анализа удается обнаружить аномальные клетки, которые имеют одну, а то и несколько мутаций генетического материала.

Как правило, это случайные находки. Например, при анализе соскоба со слизистых оболочек полости рта заядлого курильщика.

Благодаря такому способу удается обнаружить проблему на ранней стадии, когда как таковой опухоли еще нет. Но предпосылки — представлены в полном объеме.

• Исследование иммунной реакции на того или иного возбудителя. Изучают особые вещества, которые отвечают за инактивацию и сдерживание аномальных агентов, инфекционных структур. Методика отличается от схожего по целям ИФА.
• Обследование на предмет генетических аномалий. В рамках диагностики наследственных патологических процессов. В качестве основного метода.
• Также с помощью ПЦР возможно установление отцовства, родства двух людей. Но это тема для отдельного разговора.

Для исследования забирают биоматериал. Какой именно — зависит от конкретных показаний. Обычно берут мазки со слизистых оболочек полости рта, половых органов, уретры.

В качестве исходного образца изучают мочу, кровь, мокроту, слюну. Есть отдельные условия по подготовке и проведению диагностики полимеразной цепной реакции.

Подготовка и проведение анализа ПЦР

Фрагменты ДНК микроорганизмов находятся в разных биологических средах пациента. Врачи сами определяют области взятия материалов для анализа ПЦР, которые зависят от типа заболевания и его локализации. Если вы обратились к венерологу с целью выявления инфекций, передающихся половым путем (ИППП), то будут исследованы выделения из половых органов (мазок или соскоб с шейки матки, влагалища) и мочеиспускательного канала, а также кровь и моча.

Герпетические инфекции и мононуклеоз диагностируются на основании анализа мазков из полости рта пациента. ЦМВ подтверждается после обследования мочи, спинномозговой жидкости. В отделении пульмонологии для анализа ПЦР берут мокроту и содержимое плевральной полости. У беременных при подозрении на внутриутробные инфекции плода исследуют околоплодные воды и ткани плаценты.

Чтобы исключить вероятность ошибочных результатов и повысить точность анализа ПЦР, перед сдачей биологического материала следует придерживаться несложных рекомендаций:

• Большая часть микробов вымывается вместе с мочой, поэтому перед взятием мазка из уретры не стоит мочиться;
• В течение 3-5 суток следует воздержаться от половых отношений;
• Анализ ПЦР не проводится сразу после прекращения менструальных выделений, следует подождать 5-7 дней;
• За 4 часа до сдачи слюны необходимо отказаться от приема лекарственных препаратов и пищи, а перед процедурой рекомендуется прополоскать рот водой и провести легкий массаж в области щек;
• Мочу следует собирать в утренние часы в стерильный контейнер, для исключения загрязнения материала перед его взятием следует подмыться, женщинам ввести стерильный тампон во влагалище, а мужчинам максимально оттянуть складку крайней плоти;
• За сутки до сдачи материала надо воздержаться от приема алкоголя, острой пищи и горячих процедур (сауны, бани и т.п.);
• За 2 недели до анализа ПЦР необходимо прекратить прием антибактериальных средств;
• За неделю до обследования приостанавливают использование интимных гелей, мазей и вагинальных свечей.

Это довольно простые правила, но они помогут получить максимально достоверные результаты и снизить риск ошибок в диагностике.